Guía: Microscopio GUÍA MICROSCOPIO. Microscopio de Hooke (izquierda) y Microscopio de Leeuwenhoek (derecha), creadores de los primeros microscopios.


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1 . ESCUELA SALUD GUÍA MICROSCOPIO Microscopio de Hooke (izquierda) y Microscopio de Leeuwenhoek (derecha), creadores de los primeros microscopios. DIRIGIDO A ALUMNOS DE: Técnico de Laboratorio Clínico y Banco de Sangre Técnico Superior de Enfermería Técnico de Radiodiagnóstico y Radioterapia Informático Biomédico PRE-REQUISITO: No tiene.introducción

2 La microscopía óptica es una de las herramientas más utilizadas en el Laboratorio, tanto Clínico, como de otra índole. Está ampliamente distribuido en las áreas de la microbiología y la hematología. También es posible encontrar microscopía más compleja en los Laboratorios, en las áreas de la inmunología, de la histología o de la biología celular. Este tipo de microscopía se diferencian de la microscopía óptica no sólo en lo que respecta al instrumento en sí, mucho más complejo y costoso, sino que también en sus fundamentos teóricos. OBJETIVOS Al finalizar el taller el alumno será capaz de: Reconocer las distintas partes principales de un microscopio óptico, sus nombres y funciones. Realizar correctamente la simulación de observación. Realizar la correcta limpieza de las superficies de un microscopio óptico. Realizar la correcta limpieza de los objetivos y oculares de un microscopio óptico. Manipular material delicado propio de un laboratorio. REALIZADO POR: Tecnólogo Médico, Bioquímico, Químico Farmacéutico, Médico Laboratorista, Biólogo. DURACION: 90 minutos. NUMERO DE ALUMNOS POR DOCENTE: 20 alumnos

3 MARCO TEORICO: Los diversos elementos que existen en la naturaleza, presentan tamaños, formas y composiciones distintas, la mayoría de ellas pueden verse, algunas a simple vista, y otras mediante instrumentos. El microscopio óptico es un instrumento de precisión que permite ampliar la imagen de los objetos que no son visibles para el ojo humano. En el microscopio, la luz atraviesa de abajo a arriba el objeto a estudiar. Para ver con el microscopio un objeto, éste debe ser lo más fino posible. Si no lo atraviesa la luz se verá sólo un grumo deforme y opaco. Tiene un límite resolución de cerca de 200 nm (0.2 µm), es decir la distancia mínima a la que se pueden ver dos objetos separados. Este microscopio utiliza luz visible. Las células observadas bajo el microscopio óptico pueden estar vivas o fijadas y teñidas. Las muestras son depositadas en una lámina de vidrio denominada PORTAOBJETO, de unos 5 cm de largo por 2 cm de ancho. En el lugar del portaobjetos donde se puso la muestra puede, además, ponerse una laminilla muy fina de vidrio llamada CUBREOBJETO. Los oculares proporcionan diez aumentos de la imagen, y viene expresado x10 en la carcasa del ocular. También los hay x20. Los objetivos (generalmente cuatro), suelen tener aumentos de x4, x10, x40 y x100. La ampliación de la imagen resultante al multiplicar los aumentos que proporciona el ocular y el objetivo serán de 40, 100, 400 y 1000 aumentos. Ejemplo: Ampliación de 40 aumentos: Objetivo x4: aumenta 4 veces la imagen Ocular x10: aumenta 10 veces la imagen ya aumentada 4 veces por el objetivo

4 Resultado: 4 aumentos x10 aumentos = 40 aumentos Lo objetivos x4, x10 y x40, se denominan objetivos secos, porque entre la lente y la preparación a observar, la luz atraviesa el aire proporcionando una imagen nítida. El objetivo x100, se denomina objetivo de inmersión, porque para proveer imágenes nítidas, la lente debe estar inmersa en un líquido (aceite de cedro o similar), con un índice de refracción igual al vidrio, lo que permite evitar la dispersión de los rayos luminosos. Siempre que utilicemos el objetivo x100 debemos colocar una gota de aceite de inmersión sobre la preparación a observar. Partes de un Microscopio óptico:

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6 a) Sistema óptico Ocular: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo. Objetivo: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta. Sus aumentos de menor a mayor son 4x, 10x, 40x, 100x. Si se utiliza el aumento 100x es necesario agregar a la preparación aceite de inmersión. cuya función es evitar la dispersión de los rayos luminosos. Condensador: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación. Diafragma: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador. Foco: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador. Oculares y objetivos b) Sistema mecánico Soporte: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo. Platina: Lugar donde se deposita la preparación. Cabezal: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular. Revólver: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los objetivos. Tornillos de enfoque: El Tornillo Macrométrico que aproxima el enfoque y el Tornillo Micrométrico que consigue el enfoque correcto.

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8 Microscopio conectado a TV

9 INSUMOS Y EQUIPOS REQUERIDOS Sala de simulación de Laboratorio clínico. Microscopios ópticos binocular, 1 por cada 2 alumnos ( minimo) Portaobjetos: 1 por alumno Cubreobjetos: 1 caja por taller Paño o toalla de papel suave para limpiar: 1 por alumno Aceite de inmersión Solventes para limpieza de lentes: alcohol: acetona (7:3) o xilol (precaución: muy tóxico) Frontis sanguíneo teñido ( preparados listos) Caja de bioseguridad para eliminación de material cortopunzante Recipiente con solución detergente para portaobjetos sucios. DESCRIPCION DEL PROCEDIMIENTO: NOTA: Recuerde usar su delantal, pelo tomado, sin joyas en las manos, y realizar lavado de manos al ingresar al laboratorio Manejo y uso del microscopio óptico: 1. Colocar el objetivo de menor aumento (4x) en posición de empleo y bajar la platina completamente. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya debería estar en esas condiciones. 2. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas. 3. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparación es de bacterias. 4. Para realizar el enfoque seguir los siguientes pasos: Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparación con el macrométrico y, cuando se observe algo nítida la muestra, girar el micrométrico hasta obtener un enfoque fino. 5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operación

10 desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó con el objetivo de inmersión. 6. Empleo del objetivo de inmersión: Bajar totalmente la platina. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el de x40. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersión y la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revólver. En este momento ya se puede retirar la preparación de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en posición de observación. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica. Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio. Mantenimiento y precauciones: 1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda. 2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo. 3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.

11 4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio. 5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con pañuelos especiales para óptica o papel muy suave, que no deje pelusas. En cualquier caso se pasará el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcoholacetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden dañar las lentes y su sujeción. 6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico 7. Una vez finalizada la observación, el cubreobjeto debe ser depositado en una caja para material cortopunzante (safe box) y el portaobjeto se deja en un bandeja con solución de limpieza, dispuesta en el laboratorio. ACTIVIDADES Actividad 1: El docente realiza el procedimiento de mantención de las superficies y lentes del microscopio. Actividad 2: El docente realiza el procedimiento de simulación de observación, describiendo en detalle la forma correcta de poner la preparación y enfocarla. Actividad 3: Cada alumno realiza, las veces que sea necesario las actividades 1 y 2. El docente observa y corrige las actividades de los alumnos.

12 BIBLIOGRAFIA (VISITA 28/12/2004) (VISITA 28/12/2004 ) jpg (visita 2/1/2005) (visita 2/1/2005) METODOLOGIA DE EVALUACION El taller se evalúa a través de una pauta de competencias logradas de acuerdo a los objetivos planteados:

13 Nombre del alumno:... Fecha:...Nota... Microscopio C MC NC 1. Su presentación personal es correcta para el taller 2. Identifica al menos 3 partes del microscopio 3. Sabe colocar el aceite en el lugar correcto del microscopio 4 Usa el microscopio en el orden secuencial indicado 5. Coloca el porta objeto en el lugar correcto del microscopio, porque sabe su función. 4. Cumple con el orden y limpieza indicado por el docente al finalizar el taller 5. Realiza la técnica de mantención del microscopio C: competente MC: medianamente competente NC: no competente

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